球形纖維素/鈦白粉復(fù)合擴張床吸附劑的制備及其在蛋白質(zhì)純化中的應(yīng)用
來源：中國凹凸棒土網(wǎng) 11-03 10:53
擴張床吸附(EBA)技術(shù)是一種新型的生化分離技術(shù),它集成了固液分離、濃縮和初期純化于一步單元操作之中,可以直接從含有細胞和細胞碎片的發(fā)酵液或培養(yǎng)液中提取目標(biāo)蛋白,而不必事先除去懸浮的固體顆粒.吸附劑基質(zhì)是決定EBA技術(shù)能否成功應(yīng)用的關(guān)鍵性因素,它首先必須具有合適的密度和粒徑分布.該文旨在通過"反相懸浮熱再生"法制備一種纖維素-鈦白粉復(fù)合微球,作為擴張床基質(zhì).使用環(huán)氧氯丙烷活化,然后與二乙胺反應(yīng),基質(zhì)被衍生成一種陰離子吸附劑(Cell-Ti DEAHP);另外,通過環(huán)氧氯丙烷交聯(lián)后與氯乙酸反應(yīng),基質(zhì)還被制成一種陽離子交換劑(Cell-Ti CM).考察了吸附劑在擴張床中的擴張行為、流體力學(xué)特性和蛋白質(zhì)吸附能力.最后,所開發(fā)的陰離子吸附劑被應(yīng)用于從細胞勻漿中提取脫鹵酶,而陽離子交換劑則被用來從發(fā)酵液中提純納豆激酶.全文共分為四個部分.第一部分集中綜述了擴張床吸附劑基質(zhì)的研究進展,包括基質(zhì)所需要的理化性質(zhì)、常見的擴張床基質(zhì)和它們的制備方法.第二部分主要敘述纖維素-鈦白粉復(fù)合擴張床基質(zhì)和吸附劑的制備方法.詳細研究了一些影響復(fù)合微球形成的因素,得到較優(yōu)的工藝條件為:纖維素黃原酸酯粘膠粘度為5000~8000 cSt,分散相為6:1(w/w)泵油和氯苯混合物,攪拌速度為350~400 rpm.第三部分測試了所開發(fā)吸附劑的擴張床性能和蛋白質(zhì)吸附能力.研究表明,Cell-Ti DEAHP的擴張行為遵循Richardson-Zaki關(guān)系式,在水流動相中的擴張指數(shù)為5.2,終點沉降速度約為1960 cm/h.吸附劑起始裝填高度的降低和流體相粘度的增加會使擴張床中的軸向混合程度加劇.盡管如此,在實驗范圍內(nèi),所開發(fā)的吸附劑在擴張床內(nèi)的流動仍然可以近似為平推流.第四部分是吸附劑的純化應(yīng)用實例.將陰離子吸附劑Cell-Ti DEAHP應(yīng)用于從細胞勻漿中提取脫鹵酶,總收率為68％,純化倍數(shù)達22倍;將陽離子吸附劑Cell-Ti CM應(yīng)用于從發(fā)酵液中提取納豆激酶,收率達89％,純化倍數(shù)為5.6倍.較之于傳統(tǒng)的提取工藝,擴張床吸附技術(shù)節(jié)省了大量的操作時間和生產(chǎn)成本,充分顯示出其高效和集成化的特點.
關(guān)鍵詞：
擴張床吸附 基質(zhì) 纖維素 離子交換劑 過程分析 分離純化 脫鹵酶 納豆激酶
作者：
雷引林
學(xué)位授予單位：
浙江大學(xué)
授予學(xué)位：
博士
學(xué)科專業(yè)：
生物化工
導(dǎo)師姓名：
朱自強 姚善涇
學(xué)位年度：
2003
語種：
中文
分類號：
TQ424
在線出版日期：
2010年10月17日（萬方平臺首次上網(wǎng)日期，不代表論文的發(fā)表時間）
關(guān)鍵詞：
擴張床吸附 基質(zhì) 纖維素 離子交換劑 過程分析 分離純化 脫鹵酶 納豆激酶
作者：
雷引林
學(xué)位授予單位：
浙江大學(xué)
授予學(xué)位：
博士
學(xué)科專業(yè)：
生物化工
導(dǎo)師姓名：
朱自強 姚善涇
學(xué)位年度：
2003
語種：
中文
分類號：
TQ424
在線出版日期：
2010年10月17日（萬方平臺首次上網(wǎng)日期，不代表論文的發(fā)表時間）
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