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利用大規(guī)模哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)具有醫(yī)用價(jià)值的生產(chǎn)因子、干擾素、激素、疫苗、單抗和酶等，已成為生物制藥高技術(shù)產(chǎn)業(yè)鏈的核心。由于哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中，如CO2、乳酸、氨、尿素、吲哚等代謝廢物的積聚，抑制了哺乳動(dòng)物細(xì)胞的生長，大幅提高了哺乳動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)成本。如何及時(shí)去除這些代謝物，優(yōu)化哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境，進(jìn)而提高哺乳動(dòng)物細(xì)胞產(chǎn)率、降低動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)成本和生物制品的成本，是生物醫(yī)藥制品規(guī)模化生產(chǎn)和普及亟待解決的問題，具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
針對上述問題，本論文選取Vero(非洲綠猴腎細(xì)胞)哺乳動(dòng)物細(xì)胞株為研究對象，通過細(xì)胞相對活性、生長狀態(tài)變化、乳酸脫氫酶濃度以及細(xì)胞凋亡對納米級凹凸棒土(NATP)的生物學(xué)毒性進(jìn)行評價(jià)，并對其與哺乳動(dòng)物細(xì)胞的作用機(jī)制進(jìn)行探索性研究。具體研究內(nèi)容如下：
(1)納米級凹凸棒土制備方法研究。分別利用六偏磷酸鈉、鹽酸和聚丙烯酸鈉結(jié)合超聲方法對工業(yè)化用的凹凸棒土進(jìn)行二次分散提純，通過FTIR、TEM和Zeta電位對制備的納米級凹凸棒土顆粒進(jìn)行評價(jià)。研究結(jié)果表明三種處理方法中，聚丙烯酸鈉分散獲得的凹凸棒土穩(wěn)定性最好，其次是六偏磷酸鈉分散處理凹凸棒土，穩(wěn)定性最不好的是鹽酸分散處理的凹凸棒土。
(2)納米級凹凸棒土細(xì)胞毒性研究。通過與納米級凹凸棒土共培養(yǎng)的Vero哺乳動(dòng)物細(xì)胞的生長狀態(tài)、細(xì)胞相對活性、細(xì)胞的凋亡、DNA的電泳、及培養(yǎng)基中的乳酸脫氫酶的濃度變化等方面的實(shí)驗(yàn)，對納米級凹凸棒土細(xì)胞毒性進(jìn)行研究。研究結(jié)果表明：在一定的濃度范圍內(nèi)，納米凹凸棒土材料對細(xì)胞幾乎沒有毒性作用，反而促進(jìn)細(xì)胞的增殖生長。
(3)納米級凹凸棒土與細(xì)胞相互作用機(jī)制的初步探索。通過FTIR、XPS等分析方法對與哺乳動(dòng)物細(xì)胞共培養(yǎng)前后的凹凸棒土的物化性質(zhì)進(jìn)行表征，初步探索天然納米級凹凸棒土調(diào)控哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的作用機(jī)制。研究結(jié)果表明：納米級凹凸棒土可以有效降低細(xì)胞中的有害代謝產(chǎn)物的濃度，優(yōu)化哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境，調(diào)控細(xì)胞對營養(yǎng)物質(zhì)的攝取，提高細(xì)胞生長增殖的效率。

    關(guān)鍵詞：
    納米級凹凸棒土 細(xì)胞毒性 生物效應(yīng) Vero細(xì)胞系 生物制藥
    作者：
    賀麗
    學(xué)位授予單位：
    北京交通大學(xué)
    授予學(xué)位：
    碩士
    學(xué)科專業(yè)：
    生物物理學(xué)
    導(dǎo)師姓名：
    丁克儉
    學(xué)位年度：
    2012
    語種：
    中文
    分類號：
    TB383 TQ460.6
    在線出版日期：
    2012年12月31日